牛肿瘤蛋白P53(TP53)ELISA试剂盒

牛蛋白P53(TP53)ELISA试剂盒

HBsAg试剂特点（检测：临床夹心法）：包被为山羊多抗。多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。酶表为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位，可测得HBsAg变异样品，检测的特（99.98%）检测的灵敏度，应用Parl Ehrich 学说（PEI）HBsAg品，对ad品的灵敏度为0.05ng/ml对ay品灵敏度为0.025ng/ml

组成结构：

1、 ：操作中避免任何细胞。使用不含热原和内的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

2、 ：EDTA、柠檬酸盐、肝素可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

此IBL试剂盒能用于小鼠,EDTA,细胞上清中白介素-6的定量检测

试剂盒成分

1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T

2 酶标记: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1

3 品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2

4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1

5 标记稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1

6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1

7 终止液: 1N 12mL x 1

8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记和显色剂)

ELISA试剂盒的实验原理.ELISA试剂盒的实验原理是建立在抗原与学反应的基础上的，同时结合了酶的催化作用。其基本原理包括三个方面：1.抗原或能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其学活性。2.抗原或可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其学和酶学活性。3.酶结合物与相应抗原或结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。ELISA法一方面是建立在抗原与学反应的基础上，因而具有特。而另一方面又由于酶标记抗原或是酶分子与抗原或分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的性。因此，ELISA法是一种既又特异的。

酶免ELISA试剂盒是一种常用的学实验技术，常用于抗原或的定量检测。这种试剂盒利用酶联吸附法（ELISA）技术，将已知的抗原或吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。ELISA试剂盒具有高灵敏度、高特、快速、易操作等优点，在医学、生物学和化学等领域广泛应用。

牛蛋白P53(TP53)ELISA试剂盒

试验原理

试剂盒是固相夹心法酶联吸附实验（ELISA）.已知浓度的品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

自备材料

1． 蒸馏水。

2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1． 避免直接终止液和底物A、B。一旦到这些，请尽快用水冲洗。

2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

4． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的品应丢弃，不可保存。

5． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

8． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

9． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

10． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光，避免长时间于光下。避免用手，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

11． 加入试剂的顺序应一致，以所有反应板孔温育的时间一样。

12． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

牛蛋白P53(TP53)ELISA试剂盒

做好对照

正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特反应，可采用羊、兔或BSA等封闭。

实验条件的选择

在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

（1）　固相载体的选择：许多可作为固相载体，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被（或抗原）的选择：将（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。

（3）　酶标记工作浓度的选择：用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度）在正式实验里准确地滴定其工作浓度。

（4）　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

ELISA试剂盒检测中的注意事项

1、要移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。有人员进行矫正。

2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的后，要更换枪头。即使是吸取品时。

3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更。

4、实验时，要使底物避光保存。

5、用枪吸取时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

6、吸取时，要用量程和需要量接近的枪去吸，误差。

7、将加到酶标孔中时，避免枪头和孔内，可使枪头上的液滴和孔壁，液滴会自然流下去。

8、全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀。也可以用酶标仪的晃动功能。

9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加。没有洗板机时，倒去后，要将酶标板在报纸或毛纸上拍干。

11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

12、底物是光的，要在临用前现配。

13、检测前，要打开酶标仪，使之10分钟以上。

14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免。

15、待检样品要澄清，否则会影响结果。

16、温浴时间应遵守试剂盒规定。

17、应尽量做双孔实验，这样才能数据的准确性。

18、对结果有疑问的样品要用其它进行确证。